细胞转染概述及应用

细胞转染是一种将外源基因（如DNA、RNA等）通过多种化学、生物或物理方法导入真核细胞的技术。这项技术在生物医学研究中至关重要，广泛应用于以下领域：

• 基因功能研究：通过转染特定的目标基因，实现其过表达，以探讨在细胞高表达情况下对细胞功能的影响。另一方面，也可利用siRNA或shRNA干扰基因表达，以研究基因缺失时对细胞功能的影响。
• 蛋白质表达与生产：通过转染含有目标蛋白编码基因的质粒，进行蛋白质的表达与纯化。此外，融合荧光蛋白也可用于研究目标蛋白在细胞内的分布及定位。
• 细胞工程：通过转染和筛选，构建稳定表达外源基因的细胞系。
• 药物筛选与毒性测试：转染特定基因以验证药物靶点的有效性。同时，通过高通量筛选挖掘潜在药物。
• 基因治疗：导入或修复基因以治疗遗传疾病，或转染相关抗原基因，从而进行疫苗研发。

细胞转染分类

按核酸在宿主细胞时间长短分为瞬转和稳转。瞬转是指外源基因在细胞分裂时逐渐丢失，不会整合入基因组，而稳转则能将外源基因整合进基因组，从而保持表达，使后代细胞也能表达外源基因。

两者区别如下：

• 目的：瞬转旨在短期内获得高水平基因表达，而稳转则用于获取稳定表达目的基因的细胞株。
• 稳定性：瞬转因不整合基因组，稳定性较差；稳转则因目的基因已整合，稳定性较好。
• 方法：瞬转一般采用脂质体转染法，稳转更偏向病毒转染或电转等技术。
• 筛选过程：瞬转后通常无需筛选，而稳转需筛选出整合了目的基因的细胞。
• 质粒要求：瞬转质粒可不带有抗性标记，稳转则需带特定抗性以便筛选。
• 表达时效：瞬转目的基因表达一般持续数天，难以稳定遗传，而稳转则可长期稳定表达。
• 实验周期：瞬转后收细胞需24至96小时，稳转则需2至3周甚至更长时间以获取稳转细胞克隆。

按方法分类可分为物理介导法、化学介导法和生物介导法。物理介导法如电穿孔和显微注射，能直接将外源核酸导入细胞，但对细胞损伤较大，存活率低。化学介导法使用化学物质如PEI、脂质体等改善细胞膜特性，易操作但不易长期稳定表达。生物介导法则利用病毒载体如慢病毒，将外源基因包装后导入细胞，具有长期稳定表达的优势，操作相对复杂，但适用于体内外的高效基因转移。

综上所述，细胞转染方法多种多样，选择合适的转染方式取决于实验需求、实验室条件、细胞类型和转染效率等因素。目前，许多实验室主要使用化学介导的脂质体转染和生物介导的慢病毒转染。脂质体转染操作简便，但某些细胞系转染效率低，限制了实验进展。而病毒转染则能实现稳定表达，适用于非分裂的原代细胞和干细胞，并有效支持体内外实验。

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慢病毒转染服务

• 服务编号：SNTS-L001，类别：GFP稳转，目标：获得GFP稳定表达的细胞，实验周期：3-4周。
• 服务编号：SNTS-L002，类别：RFP稳转，目标：获得RFP稳定表达的细胞，实验周期：3-4周。
• 服务编号：SNTS-L003，类别：mCherry稳转，目标：获得mCherry稳定表达的细胞，实验周期：3-4周。
• 服务编号：SNTS-L004，类别：LUC稳转，目标：获得LUC稳定表达的细胞，实验周期：3-4周。
• 服务编号：SNTS-L005，类别：SV40永生，目标：获得SV40永生化的细胞（原代细胞为主），实验周期：6-8周。

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